RAPD-діагностика сортів ячменю вітчизняної та зарубіжної селекції

Анотація

Мета. Здійснити діагностику сортів ячменю вітчизняної та зарубіжної селекції за ознакою вмісту білка та ізоферментів методом полімеразної ланцюгової реакції з використанням олігонуклеотидних RAPD–праймерів, встановити відсоток можливого поліморфізму фрагментів ДНК, що відповідають цільовим локусам та встановити спорідненість сортів за досліджуваними ознаками. Методи. Матеріал досліджень складали сорти ячменю вітчизняної та зарубіжної селекції Акордіне, Командор, Богун, Аграрій. ДНК сортів виділяли з тіньових проростків твердофазним методом (фіксація ДНК на магнітному сорбенті). Ампліфікацію ДНК здійснювали ампліфікатором Bio-Rad C100 з використанням праймерів UBC-402 та UBC-475 та подальшою детекцією в агарозному гелі. Результати. Оцінка стану препаратів ДНК сортів ячменю, здійснена за допомогою гель–електрофорезу, засвідчує високу якість препаратів нуклеїнових кислот, що підтверджують тонкі бенди (смужки). За результатами полімеразної ланцюгової реакції нами встановлено локалізацію генів, що пов’язані з експресією ознак вмісту білка та ізоферментів у досліджуваних сортів ячменю. По першому праймеру локуси сортів Аккордіно та Аграрій мають довжину 341 н.п., Командор та Богун – 258 н.п. По другому праймеру локуси розміщено дещо іншим чином: Акордіно, Командор та Богун – 258 н.п., Аграрій – 341 н.п. Результати наших досліджень виявили, що кожному цільовому локусу компліментарно відповідає один декамерний праймер. Поліморфні фрагменти відсутні взагалі. Ще однією спільною рисою досліджуваних сортів ячменю є майже однакова довжина ампліфікованих фрагментів ДНК. За результатами кластерного аналізу утворено чотири окремі кластери, що свідчать про відсутність спорідненості між досліджуваними сортами ячменю за використаними праймерами. Висновки. Наші дослідження засвідчують наявність поліморфних фрагментів ДНК ячменю за двома RAPD–праймерами, натомість показують наявність локусів цільових генів, що відповідають за експресію вмісту білка та ізоферментів. Послідовність фрагментів серії компліментарних комплексів праймера: GGGCGGCAAC та GGTCGCATAA. Також вважаємо, що необхідно проводити дослідження поліморфізмусортів ячменю з використанням 10–20 праймерів RAPD, а також праймерів ISSR.